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液相色譜柱填充劑有哪些要求?

更新時(shí)間:2022-12-26點(diǎn)擊次數(shù):840
  液相色譜柱采用了新型的鍵合和端基封尾技術(shù),能夠提供的色譜峰形,這較大地提高了酸、堿、中性化合物在低、中pH條件下的分離度和定量分析的準(zhǔn)確性。
 
  較常用的液相色譜柱填充劑為化學(xué)鍵合硅膠。反相色譜系統(tǒng)使用非極性填充劑,以十八烷基硅烷鍵合硅膠較為常用,辛基硅烷鍵合硅膠和其他類(lèi)型的硅烷鍵合硅膠(如氰基鍵合硅烷和氨基鍵合硅烷等)也有使用。正相色譜系統(tǒng)使用極性填充劑,常用的填充劑有硅膠等。離子交換色譜系統(tǒng)使用離子交換填充劑;分子排阻色譜系統(tǒng)使用凝膠或高分子多孔微球等填充劑;對(duì)映異構(gòu)體的分離通常使用手性填充劑。
 
  液相色譜柱填充劑的性能(如載體的形狀、粒徑、孔徑、表面積、鍵合基團(tuán)的表面覆蓋度、含碳量和鍵合類(lèi)型等)以及色譜柱的填充,直接影響供試品的保留行為和分離效果??讖皆?5nm(1nm=10Å)以下的填料適合于分析分子量小于2000的化合物,分子量大于2000的化合物則應(yīng)選擇孔徑在30nm以上的填料。除另有規(guī)定外,分析柱的填充劑粒徑一般在3μm~10μm之間。粒徑更小(約2μm)的填充劑常用于填裝微徑柱(內(nèi)徑約2mm),使用微徑柱時(shí),輸液泵的性能、進(jìn)樣體積、檢測(cè)池體積和系統(tǒng)的死體積等必須與之匹配;如有必要,色譜條件也需作適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。當(dāng)對(duì)其測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生爭(zhēng)議時(shí),應(yīng)以品種正文規(guī)定的色譜條件的測(cè)定結(jié)果為準(zhǔn)。
 
  1.溫度的要求
 
  以硅膠為載體的普通鍵合固定相的使用溫度通常不超過(guò)35℃,為改善分離效果可適當(dāng)提高色譜柱的使用溫度,但不能超過(guò)60℃。
 
  2.流動(dòng)相的要求
 
  流動(dòng)相的pH值應(yīng)控制在2~8之間。當(dāng)pH值大于8時(shí),可使載體硅膠溶解;當(dāng)pH值小于2時(shí),與硅膠相連的化學(xué)鍵合相易水解脫落。當(dāng)色譜系統(tǒng)中需使用pH值大于8的流動(dòng)相時(shí),應(yīng)選用耐堿的填充劑,如采用高純硅膠為載體并具有高表面覆蓋度的鍵合硅膠填充劑、包覆聚合物填充劑、有機(jī)-無(wú)機(jī)雜化填充劑或非硅膠填充劑等;當(dāng)需使用pH值小于2的流動(dòng)相時(shí),應(yīng)選用耐酸的填充劑,如具有大體積側(cè)鏈能產(chǎn)生空間位阻保護(hù)作用的二異丙基或二異丁基取代十八烷基硅烷鍵合硅膠填充劑,或有機(jī)-無(wú)機(jī)雜化填充劑等。

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