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液相色譜柱的常見(jiàn)故障及解決方法

更新時(shí)間:2022-06-27點(diǎn)擊次數(shù):859
  液相色譜柱在使用一段時(shí)間后,會(huì)出現(xiàn)一定的常見(jiàn)故障,如果不能很好的判斷并解決就會(huì)影響色譜柱的使用效果,從而影響樣品的分析結(jié)果。
 
  液相色譜柱常見(jiàn)的幾種故障判斷及排除方法:
 
  1柱壓?jiǎn)栴}柱壓?jiǎn)栴}是使用高效液相色譜過(guò)程中需要密切注意的地方,柱壓的穩(wěn)定與色譜圖峰形的好壞、柱效、分離效果及保留時(shí)間等密切相關(guān)。所謂柱壓穩(wěn)定并不是 指壓力值穩(wěn)定于一個(gè)恒定值而是指壓力波動(dòng)范圍在50PSI(3.3 Bar)之間(在使用梯度洗脫時(shí),柱壓平穩(wěn)緩慢的變化是允許的)。壓力過(guò)高、過(guò)低都屬于柱壓?jiǎn)栴}。
 
  1.1 壓力過(guò)高 這是高效液相在使用中較常見(jiàn)的問(wèn)題,指的是壓力突然升高,一般都是由于流路中有堵塞的原因。此時(shí),我們應(yīng)該分段進(jìn)行檢查。
 
  (1).首先斷開(kāi)真空泵的入口處,此時(shí)PEEK管里充滿液體,使PEEK管低于溶劑瓶,看液體是否自由滴下,如果液體不滴或緩慢滴下,則是溶劑過(guò)濾頭堵塞。處理方法:用30%的硝酸浸泡半個(gè)小時(shí),在用超純水沖洗干凈。如果液體自由滴下,溶劑過(guò)濾頭正常,在檢查;
 
  (2).打開(kāi)Purge閥,使流動(dòng)相不經(jīng)過(guò)柱子,如果壓力沒(méi)有明顯下降,則是過(guò)濾白頭堵塞。處理方法:將過(guò)濾白頭取出,用10%的異丙醇超聲半個(gè)小時(shí)。如果壓力降至100PSI (6.7 Bar)以下,過(guò)濾白頭正常,在檢查;
 
  (3).把色譜柱出口端取下,如果壓力不下降,則是柱子堵塞。處理方法:如果是緩沖鹽堵塞,則用95%的水沖至壓力正常。如果是一些強(qiáng)保留的物質(zhì)導(dǎo)致堵塞,則要用比現(xiàn)在流動(dòng)相更強(qiáng)的流動(dòng)相沖至壓力正常。假如按上面的方法長(zhǎng)時(shí)間沖洗壓力都不下降,則可考慮將柱子的進(jìn)出口反過(guò)來(lái)接在儀器上,用流動(dòng)相沖洗柱子。這時(shí),如果柱壓仍不下降,只有換柱子入口篩板,但一旦操作不甚,很容易造成柱效下降,所以盡量少用。
 
  1.2壓力過(guò)低壓力過(guò)低的現(xiàn)象一般是由于系統(tǒng)泄漏,處理方法:尋找各個(gè)接口處,特別是色譜柱兩端的接口,把泄漏的地方旋緊即可。當(dāng)然還有一個(gè)原因就是泵里進(jìn)了空氣,但此時(shí)表現(xiàn)的往往是壓力不穩(wěn),忽高忽低,更嚴(yán)重一點(diǎn)會(huì)導(dǎo)致泵無(wú)法吸上液體。處理方法:打開(kāi)Purge閥,用3~5ml/min的流速?zèng)_洗,如果不行,則要用專用針筒在排空閥處借住外力將氣泡吸出。
 
  2漂移問(wèn)題 主要包括基線漂移和保留時(shí)間漂移。
 
  2.1基線漂移 一般說(shuō)來(lái),機(jī)器剛起動(dòng)時(shí),基線容易漂移,大概要半個(gè)小時(shí)的平衡時(shí)間,如果你用了緩沖溶液或緩沖鹽,還有就是在低波長(zhǎng)下(220nm)平衡時(shí)間相對(duì)會(huì)比較長(zhǎng),但如果你在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)基線漂移,則你要考慮下面的原因:
 
  1.紫外燈能量不足。解決方法:更換新的紫外燈
 
  2.柱溫波動(dòng)。解決方法:控制好柱子和流動(dòng)相的溫度,檢查是否有打開(kāi)的窗戶或空調(diào)對(duì)著柱溫箱。
 
  3.流通池被污染或有氣體。 解決方法:用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池(較好斷開(kāi)柱子)。如有需要,可以用1N的硝酸(不要用鹽酸)。
 
  4.流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成。解決方法:檢查流動(dòng)相的組成,使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級(jí)的溶劑。
 
  5、樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)(高K’值)以饅頭峰樣被洗脫出,從而表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線。解決方法:使用保護(hù)柱,如有必要,在進(jìn)樣之間。在分析過(guò)程中,定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。
 
  6、檢測(cè)器沒(méi)有設(shè)定在較大吸收波長(zhǎng)處。解決方法:將波長(zhǎng)調(diào)整至較大吸收波長(zhǎng)處
 
  7、流動(dòng)相的PH值沒(méi)有調(diào)節(jié)好。解決方法:加適量的酸或堿調(diào)至較佳PH值

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